双缩脲法蛋白含量检测试剂盒可见分光光度

双缩脲法蛋白含量检测试剂盒（可见分光光度法）

产品货号：BA

产品规格：50管/48样

产品简介：

样本可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本，尤其是动物材料。

技术指标：

最低检出限：0.mg/mL

线性范围：0.5-10mg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

提取液：自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。

需自备的仪器和用品：

离心机、可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.液体样本：澄清无色液体样本可以直接测定。

2.组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）冰浴匀浆，g，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样本常常需要稀释）

3.细菌、真菌：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1.分光光度计预热30min，调节波长到nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入μL蒸馏水，μL试剂一，混匀后室温静置15min，于nm比色，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入μL标准液，μL试剂一，混匀后室温静置15min，于nm比色，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入μL待测液，μL试剂一，混匀后室温静置15min，于nm比色，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定1-2次。

三、样本中蛋白质浓度计算

1.按液体体积计算：

蛋白质（mg/mL）=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)

=5÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)

2.按样本质量计算：

蛋白质（mg/g质量）=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)×V样总÷W

=5÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)÷W

3.按细胞数量计算：

蛋白质（mg/cell）=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)×V样总÷

=0.01÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)

C标准管：5mg/mL；V样总：样本总体积，1mL；W：样本质量，g；：细胞总数，万。

注意事项：

1.样本蛋白浓度须在0.5~10mg/mL范围内，低于0.5mg/mL不能用此法，高于10mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在0.5~10mg/mL范围内。

2.如果吸光值大于0.44，则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。

3.待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。

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